|
|
پزشکی بالینی ابن سینا، جلد ۲۱، شماره ۳، صفحات ۱۹۶-۲۰۲
|
|
|
| عنوان فارسی |
کلونینگ و بررسی بیان ژن کد کننده BMP-۲ انسانی در باکتری E. coli به منظور تولید یک داروی نوترکیب |
|
| چکیده فارسی مقاله |
مقدمه و هدف: پروتئین های مورفوژنتیک استخوانی، گروهی از سایتوکاین های متعلق به ابرخانواده TGFβ می باشند. این پروتئین ها در تکامل بسیاری از ارگان ها و بافت ها، طی دوران جنینی و پس از آن در ترمیم و بازسازی بافت های استخوان و غضروف، نقش دارند. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بررسی بیان این پروتئین در باکتری E.Coli می باشد. روش کار: در این مطالعه تجربی توالی cDNA مربوط به پپتید بالغ پروتئین مورفوژنتیک انسانی2 (BMP-2) در باکتری E.Coli کلون شد. پلاسمید نوترکیب pET28a/BMP-2 پس از توالی یابی به باکتری بیانی (E.coli BL21(DE3 ترانسفرم گردید. باکتری نوترکیب در محیط LB مایع حاوی آنتی بیوتیک کانامایسین در دمای C°37 کشت داده شد. القا با IPTG صورت گرفت. بررسی بیان به کمک RT-PCR و SDS-PAGE و تأیید بیان با وسترن بلاتینگ انجام شد. نتایج: توالی ژنی به کمک PCR تکثیر یافت. بعد از آماده سازی ژن و پلاسمید، واکنش اتصال صورت گرفت. توالی یابی، صحت کلونینگ را نشان داد. بررسی بیان با RT-PCR و SDS-PAGE نشان دهنده بیان پروتئین بود. وسترن بلاتینگ نتایج را تأیید کرد. نتیجه نهایی: بیان بالای پروتئین نوترکیب در سیستم پروکاریوتی حاصل شد. استفاده از غلظت های متفاوت القا کننده در ساعت های مختلف نشان داد که 4 ساعت بعد از القا با غلظت 1mM از IPTG ، بیشترین بیان را داریم. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Cloning of BMP-2 Gene and Its Expression Study in E. coli in Order to Produce a Recombinant Drug |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Introduction & Objective: Bone morphogenetic proteins are a group of cytokines that belongs to superfamily TGFβ. These proteins play an important role in evolution of many of organs and tissues through germinal period followed by amending and rebuilding of bone tissue and car-tilage. The aim of this study was to clone and expression analysis of BMP-2 gene in E. coli bacteria. Materials & Methods: In this experimental study the sequence of cDNA related to the mature peptide of human morphogenetic protein-2 (BMP-2) in E.coli was synthesized and cloned in a PET system. After sequencing, recombinant plasmid pET28a/BMP-2 was transformed into the expression host, E.coli BL21 (DE3). The transformed bacteria were cultured in LB me-dium containing kanamaycin antibiotic at 37° C for O/N. Then, induction with IPTG took place. The expression was evaluated by reverse transcriptase PCR and SDS-PAGE followed by western blotting to confirm its identity. The observed band on SDS-PSGE showed the presence of the expressed protein at the 14k Dalton segment which was confirmed by west-ern blotting technique. Results: The gene sequence was amplified by PCR. After gene and plasmid preparation, lega-tion was performed. Sequencing confirmed accuracy of cloning. Protein expression was demonstrated by RT-PCR and SDS-PAGE. Results were confirmed by western blotting. Conclusion: In this study over-expression of this recombinant protein was achieved in a pro-karyotic system. Different concentrations of inducer were applied and harvesting was per-formed in different times after induction. The best expression was detected in 4 hours after induction with a concentration of 1mM IPTG. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
نژاد محمدی | nejad mohammadi
جمشید کریمی | jamshid karimi
نوشین شباب | nooshin shabab
سمانه نادری | samaneh naderi
رضا یادگار آذری | reza yadegar azari
مسعود سعیدی جم | masoud saidijam
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://sjh.umsha.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2-53&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
تخصصی |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|