|
|
پزشکی بالینی ابن سینا، جلد ۲۱، شماره ۲، صفحات ۱۴۵-۱۵۱
|
|
|
| عنوان فارسی |
آنتاگونیست رسپتور اینترلوکین-۱ انسانی: کلونینگ، بیان و بهینه سازی در میزبان E.coli |
|
| چکیده فارسی مقاله |
مقدمه و هدف: آنتاگونیست رسپتور (IL-1Ra) IL - 1 یک سایتوکاین ضد التهابی قوی است که باعث محدود کردن اثرات التهابی مربوط به اینترلوکین-1 (IL-1) می شود. بعلت تشابه ساختمانی با IL-1Ra، IL-1 به طور رقابتی به رسپتور IL-1 متصل می شود ولی هیچ سیگنالی را القا نمی کند. بنابراین در درمان افراد مبتلا به بیماری های التهابی نظیر آرتریت روماتوئید بکار می رود. هدف از مطالعه حاضر کلون کردن، بیان و بهینه سازی بیان این پروتئین در E. coli می باشد. روش کار: دراین مطالعه تجربی قطعه ی ژنی سنتزی مربوط به IL-1Ra به وسیله PCR تکثیر داده شد. پس از برش دو آنزیمی، این قطعه در وکتور بیانی pET28a کلون گردید. بیان ژن مورد نظر ابتدا در سطح mRNA به روش RT-PCR و سپس در سطح پروتئین به روش SDS-PAGE مورد برسی قرار گرفت و برای تایید پروتئین بیان شده از وسترن بلات استفاده گردید. بهینه سازی بیان نیز در غلظت های مختلف IPTG و مدت زمان های مختلف بعد از القاء صورت گرفت. نتایج: به کمک روش کلنی-PCR و هضم دو آنزیمی، کلون شدن قطعه ی ژنی مورد نظر در وکتور بیانی pET28a مشخص شد. رونویسی از ژن کلون شده و بیان بالای پروتئین نوترکیب به ترتیب به روش RT-PCR و SDS-PAGE مشاهده شد. نتیجه ی حاصل از الکتروفورز پروتئین نیز با روش وسترن بلات تایید گردید. میزان بیان در غلظت های مختلف القاءکننده و مدت زمان پس از القاء بهینه سازی گردید. نتیجه نهایی: نتایج حاصل از مطالعه نشان دهنده ی بیان بالای این پروتئین در میزبانE.coli به وسیله وکتور بیانی pET28a بود. این مطالعه هم چنین نشان داد رابطه مستقیمی با افزایش بیان و مدت زمان برداشت سلول ها پس از القاء وجود دارد، لذا القاء با غلظت 1 میلی مولار IPTG به مدت یک شب برای بیان بالای پروتئین پیشنهاد می گردد. |
|
| کلیدواژه‌های فارسی مقاله |
|
|
| عنوان انگلیسی |
Human Interleukine-1 receptor antagonist:Cloning, Expression and Optimization in E.coli Host |
|
| چکیده انگلیسی مقاله |
Introduction & Objective: Interleukine-1 receptor antagonist (IL-1RA) is a powerful anti-inflammatory cytokine which limits the biological effects of IL-1. Due to structural similarity between IL-1 and its antagonist, IL-1RA competitively binds to IL-1 receptor which leads to no signal transduction. Therefore , it is applied in the treatment of patients with inflammatory diseases such as Rheumatoid Arthritis. The aim of this study is cloning, expression and op-timization of IL-1RA in E. coli. Materials & Methods: In this experimental study synthetically prepared cDNA was amplified by PCR. After double digestion with NdeI and XhoI restriction enzymes, this gene was cloned in pET28a expression vector. Expression of desired gene was analyzed at RNA level by RT-PCR and at protein level by SDS-PAGE and followed by western blot to confirm SDS-PAGE results. Optimization of recombinant protein expression was performed in dif-ferent IPTG concentrations and harvesting times after induction. Results: The presence of gene in pET28a was determined by colony-PCR and confirmed by restriction digestion. Transcription of cloned gene and expression of high yield recombinant protein were shown by RT-PCR and SDS-PAGE, respectively. The result of SDS-PAGE was confirmed by western blot. Expression was optimized in different induction time and IPTG concentrations Conclusion: The result of this study demonstrated expression of this recombinant protein at high level in E.coli system by pET28a expression vector. This study also showed a direct as-sociation between the increased level of expression and time of induction . Therefore, an overnight induction time with 0.1 mM IPTG concentration is recommended for a high level expression. |
|
| کلیدواژه‌های انگلیسی مقاله |
|
|
| نویسندگان مقاله |
قاسم براتی | ghasem barati
حسن میرزاحسینی | hasan mirza hosseini
جمشید کریمی | jamshid karimi
فاطمه ابراهیم زاده | fatemeh ebrahimzadeh
نوشین شباب | nooshin shabab
مسعود سعیدی جم | masoud saidijam
|
|
| نشانی اینترنتی |
http://sjh.umsha.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2-70&slc_lang=fa&sid=fa |
| فایل مقاله |
فایلی برای مقاله ذخیره نشده است |
| کد مقاله (doi) |
|
| زبان مقاله منتشر شده |
fa |
| موضوعات مقاله منتشر شده |
تخصصی |
| نوع مقاله منتشر شده |
پژوهشی |
|
|
|
برگشت به:
صفحه اول پایگاه |
نسخه مرتبط |
نشریه مرتبط |
فهرست نشریات
|